Loodgieter Mario is weer bij je en deze keer in Mario Bros Deluxe zal hij elk level moeten rondrennen zonder te stoppen. Hij zal met constante snelheid over het terrein rennen. Die is gevuld met verschillende obstakels, waardoor je niet zonder te springen kunt. Vooral scherpe doornen, die zich in een, twee of hele lange rijen kunnen bevinden, zijn gevaarlijk. De taak is om een paddenstoel met een groene hoed op te pakken en pas daarna zal de ingang van het kasteel verschijnen, waar de held naartoe zal gaan. Om naar het volgende niveau te gaan. Als je geen tijd hebt om te reageren en Mario de paddenstoel niet oppakt, zal hij een nieuwe cirkel moeten maken om terug te keren en de paddenstoel op te pakken. Als hij per ongeluk doornen tegenkomt, begint het level in Mario Bros Deluxe opnieuw.
